1936年在秘鲁,考古学家印第安纳·琼斯从古庙中找到宝物查查波亚生育神像。在躲避重重陷阱后,他碰到带着众多土著人堵截他的死对头考古学家贝洛克,贝洛克要求他交出金像。一番追逐后,琼斯搭乘水上飞机成功脱险。 回到美国大学校园的琼斯,遇到两名军方情报人员。他们告知琼斯,纳粹正在寻找他的前导师艾伯纳・雷文伍德。雷文伍德是研究古埃及的权威专家,纳粹重新发现了塔尼斯,认为那里藏着盛放十诫的约柜。琼斯深知纳粹的野心,雷文伍德拥有指示约柜位置的铜帽,一旦约柜落入纳粹手中,获得神秘力量的纳粹军队将称霸世界。 琼斯立刻飞往尼泊尔,却发现雷文伍德已去世,铜帽由其女儿、琼斯的前女友玛丽昂·瑞文伍德继承。盖世太保道特带领手下闯入玛丽昂的酒馆,经过激烈交火,大难不死的琼斯带着玛丽昂和铜帽前往开罗。 在开罗,两人找到经验丰富的埃及挖掘家萨拉,萨拉知道纳粹的挖掘地点。通过铜帽的指示,他们发现纳粹挖错了方位。琼斯和萨拉招募人手在正确位置挖掘,几小时后挖到藏有约柜的“灵魂之井”。害怕毒蛇的琼斯克服恐惧将约柜弄出神庙时,贝洛克和纳粹赶来劫走了约柜。 经过殊死搏斗,琼斯毁掉纳粹飞机夺回约柜,登上开往英国的货船。第二天一早,一艘德国潜艇拦住货船,贝洛克带走玛丽昂和约柜,琼斯则偷偷潜入潜艇,跟着他们来到一座荒岛,原来他们想在把约柜交给希特勒前测试其威力。琼斯不慎被俘,和玛丽昂绑在一起。贝洛克打开约柜,琼斯和玛丽昂紧闭双眼,因为目睹约柜开启的人都会死。转眼间,贝洛克和纳粹党羽全都毙命,一声惊雷后,约柜自动关闭。最终,历经九死一生,琼斯将约柜完好带回美国。
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